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對293T細(xì)胞培養(yǎng)的一些方法總結(jié)
更新時(shí)間:2019-07-23   點(diǎn)擊次數(shù):1467次

細(xì)胞傳代:

當(dāng)細(xì)胞在細(xì)胞培養(yǎng)瓶內(nèi)長滿達(dá)到80%時(shí)就要傳代,一傳二,24小時(shí)后再傳代。48小時(shí)傳就不好了,如果在24小時(shí)后細(xì)胞沒有長到80%,應(yīng)該換新的培養(yǎng)基,不然,培養(yǎng)基變黃,細(xì)胞脫落。

 

細(xì)胞消化:

將細(xì)胞培養(yǎng)瓶豎立放置,吸走培養(yǎng)基,如果培養(yǎng)基中的脫落細(xì)胞較多,說明細(xì)胞現(xiàn)在很容易脫落,只要加入1ml的PBS+EDTA(0.02%),來回輕微晃動(dòng)培養(yǎng)瓶直到細(xì)胞*脫落,加入10mlMEM(10%杭州四季青胎牛血清),混勻,不能吹打,分裝2瓶,如果細(xì)胞沒長滿就脫落,則只需加入5mlMEM,不分裝。

如果培養(yǎng)瓶中的細(xì)胞貼壁較牢固,培養(yǎng)基上清沒有細(xì)胞脫落碎片,且細(xì)胞長滿達(dá)到80%以上,吸走培養(yǎng)基,加入5ml的PBS+EDTA(0.02%),迅速輕微晃動(dòng),豎立培養(yǎng)瓶,吸走,加入1ml0.05%胰酶,37度消化不超過3min,細(xì)胞*消化脫壁,取出加入10ml培養(yǎng)基輕微吸打混勻,分裝2瓶。

 

培養(yǎng)基:

MEM(GIBCO)+10%胎牛血清(杭州四季青)+雙抗

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