ELISA試劑盒試驗(yàn)固相載體的選擇：很多物質(zhì)可作為固相載體，如聚氯乙烯、聚苯乙烯、聚丙酰胺和纖維素等。
包被抗體（或抗原）的選擇：將抗體（或抗原）吸附在固相載體表面時(shí)，懇求純度要好,吸附時(shí)通常懇求PH在9.0～9.6之間。
吸附溫度，時(shí)間及其蛋白量也有一定影響,通常多選用4℃ 18～24小時(shí)。
有些供氫體（如OPD等）有潛在的致癌作用，應(yīng)留心防護(hù)。
其方法可所以凹孔平板、試管、珠粒等。
如今常用的是40孔聚苯乙烯凹孔板。
不管何種載體，在運(yùn)用前均可進(jìn)行選擇：用等量抗原包被，在同一試驗(yàn)條件下進(jìn)行反應(yīng)，查詢其顯色反應(yīng)是不是均一性，據(jù)此判明其吸附功能是不是出色。
正式試驗(yàn)時(shí)，應(yīng)分別以陽性對(duì)照與陰性對(duì)照控制試驗(yàn)條件，待檢樣品應(yīng)作一式二份，以保證試驗(yàn)作用的性。
ELISA試劑盒試驗(yàn)條件的選擇
在ELISA中，進(jìn)行各項(xiàng)試驗(yàn)條件的選擇是很首要的，其間包括:
有條件者應(yīng)運(yùn)用不致癌、靈敏度高的供氫體，如TMB和ABTS是如今較為滿意的供氫體。
底物作用一段時(shí)間后，應(yīng)參與強(qiáng)酸或強(qiáng)堿以中止反應(yīng)。
通常底物作用時(shí)間，以10-30分鐘為宜。
底物運(yùn)用液有必要新鮮，尤其是H2O2在臨用前參與。
然后再固定其它條件或采納“方陣法”（包被物、待檢樣品的參看品及酶符號(hào)抗體分別為不一樣的稀釋度）在正式試驗(yàn)系統(tǒng)里地滴定其工作濃度。
有時(shí)本底較高，說明有非特異性反應(yīng)，可選用羊血清、兔血清或BSA等封閉。
酶的底物及供氫體的選擇：對(duì)供氫體的選擇懇求是價(jià)廉、安全、有明顯地顯色反應(yīng)，而本身無色。
蛋白質(zhì)包被的適濃度需進(jìn)行滴定：即用不一樣的蛋白質(zhì)濃度（0.1、1.0和10μg/ml等）進(jìn)行包被后，在其它試驗(yàn)條件相一起，查詢陽性標(biāo)本的OD值。
選擇OD值大而蛋白量少的濃度。關(guān)于多數(shù)蛋白質(zhì)來說通常為1～10μg/ml。
ELISA試劑盒試驗(yàn)酶符號(hào)抗體工作濃度的選擇：首先用直接ELISA法進(jìn)行開始效價(jià)的滴定（見酶符號(hào)抗體部份）。
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